Caracterización de la diapausa I en peces anuales del género Austrolebias: un abordaje morfológico y molecular

Año: 
2017
Área Proyecto: 
Básica
Los estados de dormancia permitieron a los seres vivos conquistar las regiones más extremas del planeta, mediante adaptaciones a ambientes hostiles. Las detenciones del desarrollo embrionario o diapausas en los peces anuales, son ejemplos de dormancia, que funcionan como estrategia de supervivencia a la desecación de las efímeras masas de agua en las que viven. En estas detenciones las actividades vitales disminuyen dramáticamente hasta que el ambiente retorna a las condiciones compatibles con la vida normal. En la detención y el reinicio del desarrollo estarían involucrados, además de las señales ambientales, factores maternos transferidos al embrión. A pesar del papel crucial que desempeñan las diapausas en los peces anuales, los mecanismos moleculares implicados principalmente en la diapausa I, son desconocidos. En este contexto, el presente proyecto de doctorado se propone contribuir a la caracterización de la diapausa I en Austrolebias charrua estudiando aspectos morfológicos aún no dilucidados, así como realizar diferentes abordajes para su caracterización a nivel molecular. Se analizará la distribución y morfología celular en embriones en esta detención, mediante microscopía de barrido confocal en los fenotipos alternativos observados por nuestro grupo en el laboratorio. Asimismo, se caracterizará a nivel molecular, mediante cuantificación de ARN total y ARN mensajero en diapausa I, así como antes y después de la misma; se analizará la estabilidad del ARNm usando como índice el largo de la región poliA de los ARNm obtenidos. Se identificará la expresión diferencial de proteínas en diapausa I mediante el método de “shotgun” en embriones en diapausa I respecto a embriones finalizando la epibolia y se seleccionarán algunos péptidos expresados diferencialmente para sintetizar los anticuerpos necesarios para determinar su distribución y nivel de expresión en los diferentes estadios embrionarios. La información recabada en la ejucución del presente proyecto a la que sumará la obtenida con el análisis del transcriptoma, permitirá la caracterización global de la diapausa I. Definidos como vertebrados extremófilos por la tolerancia de estos embriones a factores de estrés ambiental, responder a las interrogantes sobre la regulación de sus diapausas es un desafío que proyecta el conocimiento básico a aspectos biomédicos.
Monto total: 
$175000.00